果树苗木无毒苗的培育

果树苗木无毒苗的培育

果树苗木病毒病多由嫁接传染，一旦病毒侵入树体后，在自然条件下永远保存在树体中，无法消除。根据果树苗木病毒病及其类病毒病害的侵染、传播和发病特点，国内外总的防治策略是使用无病毒或抗病毒繁殖材料，严格植物检疫，清除和限制侵染源，防治和控制传毒虫媒。果树苗木嫁接繁殖时，如果母本树带有病毒，就必然把病毒传染给新繁殖的苗木。目前情况，在栽培的果树苗木中，有些品种已全部受病毒侵染，患有病毒病。为了避免病毒病的危害，就必须清除病树中的病毒，使之无病毒化，这是果树苗木病毒病防治对策的第一步。

获得无病毒母本树的方法主要有3种。第1种方法是从果园中选择品种纯正、多年间树势健壮、品质产量都好的单株，经病毒检验，确认无病毒后即可获得母本树；第2种方法是人工培育无病毒母本树，包括通常采用热处理与茎尖培养相结合和茎尖生长点培养2种方法；第3种方法是引进国外无病毒品种。

果树苗木热处理脱毒，是生产上应用最早、最广泛的一种脱毒手段。在果树苗木生产上，这种技术已经很成熟，已培育出许多无病毒果树苗木单株。而茎尖组织培养需要精细的技术，与热处理相比，难度大得多。但是对于用热处理不能或难于清除的病毒，用茎尖培养或热处理同组织培养相结合的方法，则可以获得无病毒的个体。此外，最近开发出的微体嫁接技术，已应用于获得无病毒个体并引起了人们的广泛关注，其主要原理是在无菌条件下培养的砧木实生苗上，嫁接茎尖分生组织，进而获得无病毒苗。

一、热处理脱毒

早在100多年前，苏格兰的园艺工作者就开始利用热力治疗植物病害。1923年，采用温汤处理而脱去甘蔗的一种病毒，成为了在病毒病害中最早脱毒成功的例子。在果树苗木方面，于1936〜1941年间，对桃丛生病、桃黄化病、伪桃病等，先后用热处理，主要是温汤浸渍法获得脱毒成功。其中对桃丛生病毒，不仅用温汤而且用高温空气处理也获得成功。同时设计出一种处理装置，探索出了热空气处理法。即把空气温度调节在30~40^0之间，处理一定时间，以达到脱毒的目的。自1950年对马铃薯卷叶病毒用热处理脱毒取得成功以来，到目前情况为止，除黄化型病毒以外，其他多种病毒的脱毒也相继取得成功。常绿果树苗木病毒病用热处理法脱毒并取得成功的实例主要有柑橘速衰病毒、柑橘裂皮类病毒、柑橘脉突病毒、柑橘碎叶病毒等。

热处理方法有2种，一是温汤浸渍和高温蒸汽处理，另一是高温空气处理。

(一）温汤浸溃和高温蒸汽处理

通常应用的有50〜551处理10~501!^、5^：处理1〜5}1或35cC处理30〜40h等多种温时组合。特别是热不稳定的病毒类，有些病例在40〜45^：处理5〜301丨11或30^：处理34即可脱毒。即树体的一部分。由于温汤处理对植物体的损害较大，有时会导致植物组织窒息或是呈水渍状，所以在对果树进行热处理时，通常只处理接穗；而高温蒸汽处理，则对-42-植物组织损害较少，因此，现在多用高温蒸汽处理。在进行热处理时，最重要的是要严格控制温度和处理时间。

(二）高温空气处理

处理的植物体，通常多用盆栽被病毒侵染的整株苗木，因为热处理所用的病株，其染病组织越小脱毒效果越高。但刚移栽的苗木根系耐热性差，一般用移栽后3个月，最好用盆栽1年左右的苗木进行处理。泥制花盆具有良好的耐热性，热处理中根部温度将比热处理温度下降数度，因此推荐用泥制花盆。所以柑橘、苹果的热处理，用无病毒的实生砧芽接带毒的病穗，芽接1周后开始进行热处理，脱毒效果良好。目前情况，热处理装置有多种，小的只有11^，大的人可以进入内部操作，可供大量试材热处理用。为调节湿度，还应安装加湿器。尽管高温空气处理不像温汤处理那样，要求病毒钝化温度与植物体能忍受温度之间相吻合，但温度及有关条件也必须力求精密。

热处理温度因病毒种类而异。有的病毒在33〜34尤条件下即可脱毒，另一些病毒必须在39〜42的条件下，才能脱毒。生产实践中，一般多用35〜381恒温，尤以381恒温的实例较多。如苹果在37尤土1尤恒温下热处理28〜30d,对褪绿叶斑病毒、茎痘病毒和茎沟病毒的平均脱毒率为26.5%。

许多病例证明，变温热处理较恒温热处理的脱毒效果好。近年来，为了减少高温对植物体的损伤，有些病例改为白天用40〜45^：处理12〜16h,夜间30〜35^：处理8~12ho

生产实践中以白天如^处理^匕，夜间30(^处理8匕的实例居多。但也不能一概而论。如柑橘速衰病毒幼苗黄化株系，在381恒温条件下处理8周不能脱毒，必须处理12周才能脱毒；反之，在白天40，夜间30(^的变温条件下，处理8周即能脱毒。柑橘碎叶病毒，38^处理16周不能脱毒，但白天401、夜间301处理6周和白天441、夜间301处理2周却脱毒成功。

在进行热处理脱毒时，还应控制好相对湿度和光照。通常相对湿度应保持在70^〜80*之间。在过分干燥的条件下，热处理的新梢生长不良。光以自然光最好，但秋冬期间，适当补充人工光照，对新梢伸长有良好作用。而有的病例用荧光灯和白色灯照明161即可脱毒。

为了提高植物的耐热性，延长植物在热处理中的生存时间，热处理前往往要进行预处理。例如，在用38^：热处理前，先在27〜351下处理1〜2周。在植物耐热性允许的范围内，热处理的温度越高脱毒效果越好，因此，前处理的温度也以逐渐由低到高为好。

植物体的耐热性与植物体各部分组织中的碳水化合物的含量成正相关，因此，应在植物组织成熟的季节进行热处理。

用热处理脱毒法培育无病毒个体时，通常是剪取苗木在热处理中伸长出的新梢顶端嫩枝，将其嫁接到无病毒实生砧木上。若是用新梢停止生长的苗进行热处理时，可剪取已硬化的枝条，直接嫁接到砧木上。对于葡萄，剪取热处理中伸长新梢或副梢的顶端部分，长约1〜5。1，扦插在珍珠岩等适宜的保湿扦插床中，不久即发根，一个月后即可移植。如果用此法不能获得无病毒个体时，就必须剪取新梢顶端更短的部分。